非洲柑桔黃龍病菌PCR試劑盒

產品及特點：

非洲柑桔黃龍病菌（Candidatus Liberobacter Africanum）是一種類菌體，柑桔感染黃龍病后，全年均可發生，一般以夏梢和秋梢發病最多，其次是春梢。新梢的癥狀是葉片表現黃化和黃綠相間的斑駁。在葉片凋落后，枝梢上新長出的葉片表現缺素狀的花葉。病梢變短、生勢衰弱，病葉黃厚、變小，且易脫落，形成枯枝。開花不適時，花開的多、落得多。果小而畸形，或紅鼻果。后期，根部往往表現為小根腐爛。此菌可以侵染蕓香科柑橘屬和金橘屬植物，引發癥狀。在田間未見枳發病，僅枳橙發病。通過菟絲子，此菌可以侵染長春花。在自然界，蕓香科蠔殼刺屬和木蘋果屬植物可能受此菌侵染，九里香屬植物常見著生大量傳播柑橘黃龍病的柑橘木虱，但其體內未見病原菌。，因此非洲柑桔黃龍病菌檢測具有重要的意義。本試劑盒根據熒光定量PCR原理開發，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增非洲柑桔黃龍病菌，與其他病原沒有交叉反應。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規格及成分：

編號	成分	規格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	非洲柑桔黃龍病菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	非洲柑桔黃龍病菌 PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 非洲柑桔黃龍病菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設置 PCR 反應(40μL 體系)：

3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
非洲柑桔黃龍病菌PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對照（非洲柑桔黃龍病菌PCR陽性對照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35個循環	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

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非洲柑桔黃龍病菌PCR試劑盒說明書
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