試劑盒中取出標準品,準備7個試管,先從200ng/mL標準品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至10ng/mL(例:50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的10ng/mL濃度標準品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將10ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標準品,依次為: 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.157ng/mL,從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進行標準品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。

抗體工作液配置
使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據所需用量配置。
以下數據和曲線僅供參考,實驗者需根據自己的實驗數據建立標準曲線。
| 
											 標準品濃度(ng/mL)  | 
										
											 10  | 
										
											 5  | 
										
											 2.5  | 
										
											 1.25  | 
										
											 0.625  | 
										
											 0.313  | 
										
											 0.157  | 
										
											 0  | 
									
| 
											 OD值  | 
										
											 2.513  | 
										
											 1.65  | 
										
											 0.903  | 
										
											 0.682  | 
										
											 0.545  | 
										
											 0.291  | 
										
											 0.183  | 
										
											 0.073  | 
									
| 
											 校正OD值  | 
										
											 2.440  | 
										
											 1.577  | 
										
											 0.83  | 
										
											 0.609  | 
										
											 0.472  | 
										
											 0.218  | 
										
											 0.11  | 
										
											 0  | 
									
下圖所示標準曲線僅供示例,結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果

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