| 
						 
							1 
						 
					 | 
					
						 
							30倍濃縮洗滌液 
						 
					 | 
					
						 
							20ml×1瓶 
						 
					 | 
					
						 
							  
						 
						
							  
						 
						
							8 
						 
					 | 
					
						 
							標(biāo)準(zhǔn)品S1(40ng/mL) 
						 
					 | 
					
						 
							0.5ml×1瓶 
						 
					 | 
				
				
					| 
						 
							2 
						 
					 | 
					
						 
							酶標(biāo)試劑 
						 
					 | 
					
						 
							6ml×1瓶 
						 
					 | 
					
						 
							標(biāo)準(zhǔn)品S2(20ng/mL) 
						 
					 | 
					
						 
							0.5ml×1瓶 
						 
					 | 
				
				
					| 
						 
							3 
						 
					 | 
					
						 
							酶標(biāo)包被板 
						 
					 | 
					
						 
							12孔×8條 
						 
					 | 
					
						 
							標(biāo)準(zhǔn)品S3(10ng/mL) 
						 
					 | 
					
						 
							0.5ml×1瓶 
						 
					 | 
				
				
					| 
						 
							4 
						 
					 | 
					
						 
							顯色劑A液 
						 
					 | 
					
						 
							6ml×1瓶 
						 
					 | 
					
						 
							標(biāo)準(zhǔn)品S4(5ng/mL) 
						 
					 | 
					
						 
							0.5ml×1瓶 
						 
					 | 
				
				
					| 
						 
							5 
						 
					 | 
					
						 
							顯色劑B液 
						 
					 | 
					
						 
							6ml×1瓶 
						 
					 | 
					
						 
							標(biāo)準(zhǔn)品S5(2.5ng/mL) 
						 
					 | 
					
						 
							0.5ml×1瓶  
						 
					 | 
				
				
					| 
						 
							6 
						 
					 | 
					
						 
							終止液 
						 
					 | 
					
						 
							6ml×1/瓶 
						 
					 | 
					
						 
							9 
						 
					 | 
					
						 
							說(shuō)明書 
						 
					 | 
					
						 
							1份 
						 
					 | 
				
				
					| 
						 
							7 
						 
					 | 
					
						 
							樣品稀釋液 
						 
					 | 
					
						 
							6ml×1/瓶 
						 
					 | 
					
						 
							10 
						 
					 | 
					
						 
							封板膜 
						 
					 | 
					
						 
							2張 
						 
					 | 
				
			
		
	
	
		標(biāo)本要求 
	
	
		1.標(biāo)本處理:
	
	
		(1)水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后,備查
	
	
		(2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,備查
	
	
		2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
	
	
		操作步驟 
	
	
		1.加樣:分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
	
	
		2.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
	
	
		3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。  
	
	
		4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 
	
	
		5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 
	
	
		6.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
	
	
		7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 
	
	
		8.測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 
	
	
		計(jì)算 
	
	
		 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。  
	
	
		注意事項(xiàng) 
	
	
		1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 
	
	
		2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 
	
	
		3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 
	
	
		4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 
	
	
		5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 
	
	
		6.底物請(qǐng)避光保存。 
	
	
		7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 
	
	
		8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 
	
	
		9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 
	
	
		檢測(cè)范圍: 
	
	
		1ng/mL - 50ng/mL 
	
	
		規(guī)格: 
	
	
		96份/盒 
	
	
		保存條件及有效期 
	
	
		1.試劑盒保存:2-8℃。 
	
	
		2.有效期:6個(gè)月