ELISA，即酶聯免疫吸附測定，是現代生命科學領域一項不可或缺的基石技術。無論是在疾病診斷、藥物研發還是基礎科研中，它都為研究人員提供了高靈敏度、高特異性的檢測手段，能夠對微量生物分子進行精確定量。那么，ELISA是什么檢測方法？本文將為您詳細解讀。

什么是ELISA

酶聯免疫吸附測定法ELISA（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay），是一種將抗原抗體的特異性免疫反應與酶的高效催化作用相結合的檢測技術。其核心原理（以最常見的雙抗體夾心法為例）可分為以下幾個步驟：

1.包被：將特異性的捕獲抗體固定（包被）在固相載體（如96孔酶標板）的表面，然后洗滌去除未結合的抗體。

2.加樣：加入待測樣本，如果樣本中含有目標抗原，它就會與固相載體上的捕獲抗體特異性結合。之后洗滌，去除樣本中其他未結合的雜質。

3.加酶標抗體：加入酶標記的檢測抗體。該抗體能與已經被捕獲的抗原上的另一個位點結合，形成“捕獲抗體-抗原-酶標檢測抗體”的“三明治”復合物。然后再次洗滌，去除多余的、未結合的酶標抗體。

4.顯色：加入酶的底物溶液。復合物上的酶會催化底物發生反應，產生顏色變化。

5.分析：顏色的深淺與樣本中抗原的濃度成正比。通過酶標儀測定吸光度值（OD值），即可對目標抗原進行定性或定量分析。

ELISA類型

根據實驗設計不同，ELISA可分為4種主要類型，以適應不同的檢測需求。

1.直接ELISA(DirectELISA)：這是ELISA類型中比較簡單的方法。將抗原固定后，直接加入被沒標記的特異性抗體進行檢測。優點是步驟少，速度快；缺點是每個抗體都要單獨標記，成本高且靈活性差。

2.間接ELISA(IndirectELISA):相比直接ELISA，間接ELISA會多出一個步驟，先加入不帶標記的一抗，再加入能識別一抗的酶標二抗。優點是靈敏度高，且一種標記二抗可用于多種不同一抗，通用性強，成本效益高。

3. 夾心ELISA(SandwichELISA)：這是一種將待檢測抗原夾在兩種抗體之間，像三明治一樣。先將“捕獲抗體”固定，加入樣本后捕獲抗原，再加入“檢測抗體”進行識別。這種雙抗體識別模式使其特異性和靈敏度都非常高，是定量檢測抗原“金”標準。

4.競爭ELISA(CompetitiveELISA)：當待檢測分子量很小或抗體配對很困難時使用。樣本中的抗原會與我們加入的已知濃度抗原去“競爭”結合固定抗體。樣本中的抗原越多，結合標記抗原就越少，顏色反應就越弱。因此，信號強度與濃度成反比例。因此，信號強度與樣本濃度成反比。

ELISA步驟

雖然不同ELISA類型細節有所不同，但核心步驟萬變不離其宗，通常在一個被稱為“ELISA板”的96孔板中進行：

1.包被：將抗原或捕獲抗體固定在ELISA微孔板的表面。

2.封閉：用牛血清白蛋白（BSA）等無關蛋白，封閉板上未結合的位點，防止后續抗體非特異性吸附。

3.加樣與孵育：加入待測樣本或抗體，在特定溫度下孵育，讓抗原抗體充分反應。

4.洗滌：吸取未結合的物質，減少背景干擾。

5.加入酶標抗體和底物：加入酶標抗體，孵育并洗滌，再加入酶底物顯色。

6、終止反應與讀板：加入終止液停止顏色反應，并使用酶標儀在特定波長下讀取各孔的吸光度（OD）值，最終計算出結果。

Elisa應用

Elisa憑借其強大的檢測能力，滲透在各個領域：

醫學診斷：檢測病毒抗體（如HIV、肝炎病毒）、激素水平（如HCG驗孕）、腫瘤標志物等。

食品安全：檢測食物中的過敏原、獸藥殘留、非法添加劑、致病菌毒素等。

生命科學研究：定量檢測細胞因子、生長因子等各種蛋白質的表達水平。

環境監測：檢測水體和土壤中的農藥殘留及工業污染物。

藥物研發：用于篩選藥物和評估藥代動力學。

綜合上述，ELISA（酶聯免疫吸附測定）是一種基于抗原抗體特異性結合，并通過酶催化顯色反應進行定量或定性分析的強大免疫檢測方法。它以其多樣化的類型和標準化的操作流程，成為了現代科學研究和工業檢測中不可或缺的工具。

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