細胞通常以冷凍狀態交付。因此，正確解凍對于獲得高細胞存活率和理想的細胞狀態至關重要。本文將介紹細胞解凍方法和要點。

細胞解凍概述

閱讀細胞的數據表:仔細閱讀供應商提供的數據表，了解特定細胞系的解凍步驟和建議。

1.準備材料:預熱合適的培養基至37°C(或根據數據表)，并準備好已滅菌的培養瓶/皿(如有需要，進行預先包被)。

2.取出細胞:從液氮或-80°C冰箱中取出凍存管。注意安全操作，避免凍傷。

3.快速解凍:將凍存管迅速放入37°C水浴中，并輕輕搖晃，使細胞盡快解凍(通常1-2分鐘)。避免完全解凍，凍存管中仍留有少量冰晶時即可取出。

4.稀釋細胞:將解凍的細胞緩慢加入預熱的培養基中，輕輕混勻。根據數據表建議的比例進行稀釋。

5.孵育細胞:將細胞懸液轉移至準備好的培養瓶/皿中，并在推薦的溫度(通常37°C)和CO2濃度下孵育。

6.觀察細胞:在解凍后不同時間點(例如，24小時、48小時)觀察細胞的生長狀態和形態，確保細胞正常復蘇。

細胞解凍所需材料

1.細胞凍存管

2.培養基(參考細胞數據表確定最佳預熱溫度)

3.70%乙醇

4.臺盼藍(可選，用于評估細胞活力)

5.個人防護設備(實驗室手套、實驗服、防護眼鏡、液氮罐皮手套等)

6.用于運輸凍存管的容器(例如泡沫塑料盒，如果需要從液氮罐中取出細胞)

7.37°C水浴

8.移液器和合適的吸頭

9.小瓶支架(可選)

(如果需要進行后續細胞培養和觀察):

10.孵化器

11.培養瓶/皿和標簽

12.倒置顯微鏡/相差顯微鏡

13.血細胞計數器(可選)

14.離心機(可選，如果需要去除DMSO)

細胞解凍步驟

1.查看數據表:仔細閱讀細胞隨附的數據表，了解具體的培養條件和解凍步驟。

2.準備工作:在生物安全柜中進行所有操作。預熱培養基至37°C，準備好培養瓶/皿并貼好標簽(傳代號、細胞名稱、批號和日期)。

3.取出凍存管:從液氮罐或-80°C冰箱中取出凍存管。注意安全操作，佩戴合適的防護措施(例如低溫手套和護目鏡)。

4.處理液氮(如果需要):如果發現凍存管內有液氮，應在安全柜中靜置片刻，待液氮氣化后再打開。

5.解凍細胞:將凍存管迅速放入37°C水浴中，輕輕搖晃，使細胞盡快解凍(通常1-2分鐘，當凍存管中仍留有少量冰晶時即可取出)。注意不要將蓋子浸入水中。

6.擦拭表面:用70%乙醇棉簽擦拭凍存管外表面。

7.稀釋細胞:在生物安全柜中打開凍存管，用移液器將細胞懸液轉移到裝有預熱培養基(例如5-10mL)的離心管中，輕輕混勻。

8. (可選)細胞計數和活力檢測:取少量細胞懸液，用臺盼藍染色，并用血細胞計數器進行計數和活力評估。

貼壁細胞系:將細胞懸液轉移到培養瓶/皿中，加入適量預熱培養基至推薦體積。

懸浮細胞系:以150xg離心5分鐘，棄上清，用新鮮預熱培養基重懸細胞，然后轉移到培養瓶/皿中。

9.培養細胞:將細胞放入孵化器中，在指定的溫度和CO2濃度下培養。

10.觀察細胞:24小時后(或根據細胞類型調整時間)在顯微鏡下觀察細胞狀態，并根據需要進行傳代培養。

解凍細胞時的注意事項

1.快速解凍:將凍存管在37°C水浴中快速解凍(通常1-2分鐘)，并輕輕搖晃，使內容物均勻受熱。避免完全解凍，凍存管中仍留有少量冰晶時即可取出。

2.立即稀釋:將解凍的細胞懸液立即加入預熱至37°C的培養基中，輕輕混勻。

3.去除DMSO(強烈建議):除非細胞系明確對DMSO不敏感且數據表中明確說明無需去除，否則建議通過離心(例如200-300xg，5分鐘)去除DMSO。棄去上清液，用新鮮預熱培養基重懸細胞。

4.避免緩慢解凍:不要在室溫或培養箱中解凍細胞，因為緩慢解凍會降低細胞活力。

5.CO2培養箱:使用CO2培養箱進行細胞培養。如果沒有CO2培養箱，建議使用替代方案，例如含HEPES緩沖液的培養基。

6.傳代培養:在細胞達到完全匯合之前進行傳代培養，以保持細胞的最佳生長狀態。一些細胞類型(例如NIH3T3)對接觸抑制特別敏感。

7.恢復緩慢的細胞:對于生長緩慢的細胞(例如一些雜交瘤)，可以考慮在補充有20%FBS和10%條件培養基的培養基中培養，以促進其恢復。

以上，我們講解了細胞解凍的正確步驟和注意事項。正確執行基本操作對實驗的效率和成功至關重要。尤其是在熟悉實驗步驟的過程中，您很可能會犯錯并失敗，因此請務必不時閱讀這些注意事項。